Pembersihan ambulans memerlukan keseimbangan kebersihan kendaraan secara umum dengan persyaratan keselamatan medis tertentu; biasanya dibagi menjadi tiga komponen: pembersihan eksterior, pembersihan kabin interior, dan desinfeksi peralatan medis. Pembersihan eksterior berfokus terutama pada menghilangkan lumpur, debu, dan kontaminan; hal ini umumnya dilakukan dengan membilas dengan air bersama dengan deterjen netral, sambil menghindari penggunaan bahan kimia yang sangat korosif untuk mencegah kerusakan pada cat kendaraan dan stiker peringatan.
Mengingat kabin bagian dalam berfungsi sebagai ruang untuk prosedur medis, standar pembersihan untuk area ini jauh lebih ketat. Segera setelah selesainya setiap misi pengangkutan pasien, segala kotoran atau kontaminan di dalam kabin harus segera dibersihkan. Selain itu,-permukaan yang sering disentuh-seperti tandu, kursi, pegangan tangan, dan lantai-harus menjalani disinfeksi menyeluruh. Hal ini biasanya dilakukan dengan menyeka atau menyemprot permukaan tersebut dengan disinfektan yang memenuhi standar medis yang ditetapkan, sehingga memastikan eliminasi bakteri dan virus secara efektif serta mencegah-kontaminasi silang.
Mengenai peralatan medis di dalam pesawat-seperti monitor pasien, defibrilator, dan sistem pengiriman oksigen-prosedur pembersihan dan disinfeksi khusus harus diikuti sesuai dengan protokol pengelolaan perangkat medis. Perhatian khusus harus diberikan untuk mencegah cairan masuk ke bagian dalam perangkat ini, yang dapat mengganggu fungsionalitasnya. Selain itu, kendaraan harus menjalani pembersihan mendalam secara berkala dan disinfeksi menyeluruh; khususnya, setelah pengangkutan pasien dengan penyakit menular atau penyelesaian misi yang melibatkan risiko kontaminasi tinggi, protokol disinfeksi terminal yang ketat harus dilaksanakan untuk memastikan kendaraan secara konsisten memenuhi semua persyaratan keselamatan untuk penggunaan medis.
